单克隆筛选
集流式细胞术和微流控技术于一体的新一代细胞分离设备。流式细胞仪的流体聚焦技术能够大大提高检测灵敏度,另外微流控技术使得设备内部的鞘液压力可以降至2psi以下,也无需高频振荡,减少了分选过程对细胞的伤害,提高了分选出来的细胞的活性。另外,一次性芯片实现了细胞分选过程中,样本之间的完全隔离(从加样到分离全都在芯片中完成)。
单克隆筛选工作原理:
单克隆筛选的重要性:
在单抗开发领域中,细胞株的构建关键环节是要筛选高表达细胞的单克隆,这是FDA等监管部门的要求,也是确保抗体稳定性的重要依据。在以往的细胞株构建环节中,用户往往采用手动的有限稀释法往96孔板中铺细胞。一般他们会按照0.5或者0.3个细胞每孔,进行细胞铺板。按照泊松分布的规律,会有30%-40%的孔中能进去单细胞,其余的孔含有的细胞数为零个或者两个以上。接下来还要观察孔中的细胞生长情况,通常会采用孔板成像设备对细胞生长状态进行跟踪拍照观察,一般会在铺板完成当天也就是第0天,第1天,第3天......进行拍照存档,为后期确定单克隆提供关键证据。
上述手动有限稀进行单克隆筛选,是操作极为简单且成本极低的方式,但是同时效率也是很低的。为了确保更多的孔中铺进去的是单细胞,所以铺板的初始细胞密度不能过高。
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单克隆筛选